РКЗО «Межівська середня загальноосвітня школа І-ІІІ ступенів №2»
Майстер-клас «Бактерії в нашому житті»
Вчитель біології Грицай Людмила Василівна
Інструктаж з ТБ.
Всі ми з вами багато говоримо про бактерії про їх позитивну та негативну роль. Але побачити неозброєним оком ми їх не можемо. Так як я за спеціальністю мікробіолог, хотіла б присвятити сьогоднішній майстер-клас бактеріям.
Для лабораторних досліджень беруть різні матеріали з яких висівають культури бактерій. Інколи для більш детальної ідентифікації проводять декілька пересівів на різні елективні середовища.
Зараз ми з вами спробуємо пересіяти культури із чашки Петрі, на косячки у пробірки з МПА з глюкозою.
Запалюємо пальник, навколо вогню в радіусі 15 см стерильна зона, в якій ми працюватимемо. Прожарюємо бактеріологічну петлю до червоного. Виносимо з вогню, обережно охолоджуємо, об кришку чашки і обережно беремо колонію культури. Потім штрихоподібними рухами ковзаємо по агару у пробірці із дна до верху. Прожарюємо петлю. Потім закриваємо пробкою і ставимо у штатив і в термостат на добу при температурі 37 С.
Наступним кроком нашого майстер-класу буде фарбування за Грамом.
Бактеріоскопічний (мікроскопічний) метод – сукупність способів виявлення та вивчення морфологічних і тинкторіальних властивостей бактерій (мікробів). Застосовують для встановлення діагноза інфекції, захворювання чи іншого викликаного мікробами процесу, а також при ідентифікації виділеної чистої культури.
лабораторній практиці використовують такі типи мікроскопічних методів:
1) висячу краплю
2) придавлену краплю
3) тонкий мазок крові, гною, мокротиння та ін;
4) товсту краплю
5) агар-мікроскопію
6) препарат-відбиток
7) фіксований мазок.
У бактеріологічній практиці частіше застосовують останній метод. Витираємо предметне скло ваткою змоченою спиртом, крапаємо фізіологічний розчин. Прожарюємо бактеріологічну петлю до червоного. Матеріал наносимо на чисте, знежирене предметне скло, за допомогою бактеріологічної петлі і розподіляємо по площі в 1 см в краплині фізрозчину, ретельно розмішуємо і розподіляємо по склу. Величина внесеного матеріалу залежить від передбачуваної кількості бактерій в ньому. Приготований мазок висушуємо на відкритому повітрі або в теплому струмені повітря, препарат фіксуємо на склі для забезпечення безпеки подальшої роботи, прикріплення бактерій до скла, кращого сприйняття ними фарби, оскільки структури вбитих бактерій легше і міцніше сприймають барвники; фіксовані мазки забарвлюємо карболовим розчином генціановий фіолетового 1-2 хв, занурюючи мазок в барвник або наливаючи його на препарат так, щоб вся поверхня препарату була вкрита суцільним шаром барвника, і добре просушують на повітрі. Погано висушений препарат дає каламутне зображення при імерсійній мікроскопії через утворення емульсії. Протягом 1 хв обробляємо розчином Люголю, знебарвлюємо спиртом 10-20 сек., промиваємо водою, дофарбовуємо фуксином 1-2 хв.
У Грам + муреїновий комплекс великий (багатошаровий) і зафарбовується зразу в синій колір. У Грам –, синій колір вимивається спиртом, тому, що мурен 1-2 шаровий і потім зафарбовується в рожевий колір (фуксином). Цінність цього методу полягає в простоті, доступності методик і швидкості отримання результатів (30 – 60 хв і менше).
Метод фарбування за Грамом.
1. Фіксований мазок забарвлюють карболовим розчином генціановий фіолетового протягом 1-2 хвилин.
2. Протягом 1 хвилини обробляють мазок розчином Люголя.
3. Знебарвлюють спиртом 10-20 сек.
4. Промивають водою.
5. Дофарбовують мазок водним розчином фуксину 1-2 хвилини.
| 